阻濕態微生物穿透儀試驗操作方法

阻濕態微生物穿透儀

濕態阻菌測試儀又稱為“ 阻濕態微生物穿透性測試儀”，RULLA 2濕態阻菌測試儀系標準ISO 22610 對阻濕態微生物穿透試驗的儀器，也是中國國家食品藥品監督管理局標準YY/T 0506.6阻濕態微生物穿透試驗方法實驗儀器。

工作原理：

用鋼環將三層材料（試驗材料在下，菌片居中，高密度聚乙烯膜在上面）卡在一起，將此環套件置于轉盤上的瓊脂培養皿上，試驗指以能在整個培養皿表面上移動的方式使材料受到壓力和摩擦的綜合作用，以此模擬在實際應用過程中屏障材料可能發生的受力情況和濕態條件下的微生物穿透。菌片上的微生物穿透試驗材料后會遷移到瓊脂培養基表面，通過對瓊脂培養皿的培養和菌落計數，可對試驗材料的穿透性能進行定量評價。

基本結構：

該儀器有一個電驅動、電子計時器控制、轉速為60rpm的轉盤，轉盤上可安裝一個14cm直徑的瓊脂培養皿。帶有試驗指的平衡桿被一個轉速為5.60rpm的偏心軸所引導，可使重力為3±0.02N的試驗指從轉盤的中心向周邊作側向的往復運動。在一個試驗周期內，兩個運動的疊加，能使試驗指的作用軌跡均勻布滿整個圓盤表面。總重量為800±1g的內外鋼環在試驗中用以夾持供試材料并對材料施加標準的繃緊力。儀器還附帶一個直徑9cm、高4cm的圓柱體，用于在三層材料的固定過程中提供平整的表面和統一的繃緊度。

阻濕態微生物穿透儀

試驗方法：

1 菌片制備

金黃色葡萄球菌ATCC 29213在胰酶大豆瓊脂上36℃±1℃下培養18-24h，將2-3個菌落接種至3ml胰酶大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對終菌懸液進行計數。

打開無菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤子上。用培養皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個相應的區域，在該區域涂布1.0ml金黃色葡萄球菌懸浮液，然后將菌片到56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

菌片制備好后當日使用。

2 狀態調節

如需要，按照GB6529對試件進行狀態調節，也可在標準正常室溫條件下進行狀態天界和試驗。狀態調節的方法應記錄在試驗報告中。

3 試驗設定

調節控制桿上配重，使試驗指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

將一個瓊脂培養皿放在轉盤上。

4 材料應用

用下列計數：采用一個由內、外環組成的圓形砝碼，總重800g±1g對材料施加標準的繃緊力。將圓柱放在內環中央，再將試件覆蓋在圓柱體和內環上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環，使三層材料牢固的加在兩個環之間。

5 試驗

將上述環組件輕輕搭放在一個去下蓋子的瓊脂培養皿上，鋼環自由懸放于旋轉盤的外面，將試驗指置于皿口內測的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗指按上述規定施加3N壓力，是儀器運行15min。

15min后立即取下環套件放在一邊。

從旋轉盤上取下一個培養皿并放上皿蓋。馬上將第二個培養皿和環套件放在旋轉盤上。

對后面的四個培養皿用同一個環套組件執行上述步驟。

五個培養皿完成試驗后，取下菌片并棄去，將試件反轉，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個培養皿上操作15min,即完成一個平行試驗組。

其余4片試件同樣按上述方法各運行六個培養皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺上干燥，將各瓊脂培養皿加蓋置于36℃±1℃培養48h。

計數每只培養皿中金黃色葡萄球菌菌落數，培養皿中心15min半徑區域內的菌落數不計。

如果右一個皿或多個皿的計數大于750CFU（不包括上述的培養皿中心15min半徑區域內的菌落數），可重新驚醒試驗。如果重新試驗仍有一個或多個皿計數大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗。